Toxicologia forense: uso e importância da Cadeia de Custódia.

Em toxicologia forense, as análises são usadas na detecção e identificação de agentes tóxicos para fins médico-legais. As atividades da toxicologia forense têm sido importantes para a sociedade, que tem efetuado enormes esforços no sentido de iniciar e implantar os procedimentos analíticos de uma forma credível em termos forenses, como auxílio na tomada de decisões sobre a relação causa/efeito entre um determinado composto e um efeito adverso observado (COSTA, 2008).

O toxicologista forense tem sempre que escolher, entre as varias técnicas analíticas disponíveis, aquela que é mais conveniente numa determinada análise toxicológica. Esta escolha deve ser embasada em critérios técnicos como a aplicabilidade, sensibilidade, seletividade, precisão e exatidão da técnica, além da disponibilidade e do custo da análise. (COSTA, 2008).

Na análise forense todos os procedimentos relacionados à evidência, desde a coleta, o manuseio e análise, sem os devidos cuidados e sem a observação de condições mínimas de segurança, podem acarretar na falta de integridade da prova, provocando danos irrecuperáveis no material coletado, comprometendo a idoneidade do processo e prejudicando a sua rastreabilidade (LOPES et. al., 2006).

Um elemento importante em qualquer investigação de tipo forense é a manutenção da "cadeia de custódia”. A cadeia de custódia é usada para manter e documentar a história cronológica da evidência, para rastrear a posse e o manuseio da amostra a partir do preparo do recipiente coletor, da coleta, do transporte, do recebimento, do armazenamento e da análise, portanto, refere-se ao tempo em curso no qual a amostra está sendo manuseada e inclui todas as pessoas que a manuseia. Esta terminologia vem sendo legalmente utilizada para garantir a identidade e integridade da amostra, em todas as etapas do processo.

A documentação requerida para os vestígios questionados colhidos em local de crime ou para as evidências conhecidas (padrão), geralmente colhidas no interior dos laboratórios forenses, deve incluir anotações permanentes sobre (NASCIMENTO, & SANTOS):

• Data e hora da coleta

• Nome da pessoa(s) que coletou (aram) a evidência

• Listagem descritiva do item ou itens coletados

• Identifi cação única para cada item coletado

• Localização de cada item (documentação escrita, croqui, 

medições, fotografi as ou uma combinação delas).

A preservação da cadeia de custódia não está restrita as fases do inquérito policial. O magistrado, e demais serventuários, também tem a obrigação de manter o rigor no  controle da cadeia de custódia. Estes,  devem adotar os mesmos procedimentos  acerca da embalagem, do lacre, do transporte e do acondicionamento quanto estiverem tramitando as evidências na instituição judiciária (NASCIMENTO, & SANTOS).

Na área de toxicologia forense, todas as amostras são recebidas como evidências, as quais serão analisadas e o seu resultado, apresentado na forma de laudo que será utilizado no processo judicial. Estas devem ser manuseadas de forma cautelosa, para evitar futuras alegações de adulteração ou má conduta que possam comprometer as decisões relacionadas ao caso em questão. Nesta situação, a cadeia de custódia permite ao perito garantir e provar a integridade do processo ao qual a amostra foi submetida.

Nesta área, as amostras são, na maioria das vezes, únicas e a perda das mesmas significa um prejuízo, na medida que pode inviabilizar ou prejudicar a análise toxicológica. Assim, a cadeia de custódia viabiliza o controle sobre o trâmite da amostra com a identificação nominal das pessoas envolvidas em todas as fases do processo, caracterizando as suas responsabilidades, as quais são reconhecidas institucionalmente.

Portanto, uma cadeia de custódia segura, juntamente com o conjunto das técnicas analíticas utilizadas pelo perito para a realização do exame devido em uma evidência constituída em elemento de prova é que conduzirá à  produção de um laudo pericial defensável, logo, em  prova apreciável ou de cotejo para o esclarecimento de uma verdade no âmbito judicial penal (NASCIMENTO, & SANTOS).

Leituras adicionais: 

COSTA, L. J. Eletroforese capilar como ferramenta analítica para toxicologia forense. 2008. Tese (Doutorado) - Instituto de Química da Universidade de São Paulo, São Paulo, 2008.

NASCIMENTO, L. J. M., SANTOS, M. V. F. D. L. CADEIA DE CUSTÓDIA. Laboratório Central de Polícia Técnica. Disponível em: < http://www.dpt.ba.gov.br/arquivos/downloads/provamaterial/prova%20material%206.pdf > acesso em novembro de 2011.

LOPES, M., GABRIEL, M. M., BARETA, G. M. S. Cadeia de custódia: uma abordagem preliminar. Visão Acadêmica, Vol. 7, No 1 (2006)

http://www.cpgls.ucg.br/ArquivosUpload/1/File/V%20MOSTRA%20DE%20PRODUO%20CIENTIFICA/SAUDE/53.pdf

Solvente industrial aumenta risco de Parkinson, diz estudo.

Um estudo internacional concluiu que pessoas expostas ao solvente industrial tricloroetileno (TRI) no ambiente de trabalho têm um risco seis vezes maior de apresentar mal de Parkinson.

TRI pode ser tóxico a longo prazo

          Diversos usos da substância química foram proibidos ao redor do mundo, devido a preocupações sobre sua toxicidade, mas o TRI ainda é utilizado como agente desengordurante.

          Os pesquisadores de institutos dos Estados Unidos, Canadá, Alemanha e Argentina analisaram dados de 99 pares de gêmeos selecionados a partir de registros americanos, em que um dos irmãos tinha mal de Parkinson e o outro não. Estudos anteriores indicam que a doença é causada por uma mistura de fatores genéticos e ambientais. Alguns dos sintomas são tremores e dificuldades de movimento e de fala.

Gêmeos

        A pesquisa queria analisar os efeitos de da exposição a seis tipos de solvente, incluindo o TRI. A decisão de estudar gêmeos foi tomada porque eles são semelhantes geneticamente e muitas vezes tem estilos de vida parecidos, o que reduz a ocorrência de resultados artificiais.

          Os gêmeos foram entrevistados para que se chegasse a um histórico de sua vida profissional e para que sua exposição a solventes fosse estimada. Eles também responderam perguntas sobre hobbies e passatempos. Os resultados estão sendo apresentados como o primeiro estudo a fazer "uma associação significativa" entre a exposição ao TRI e o mal de Parkinson.

       Os solventes percloroetileno e tetracloreto de carbono também "indicaram risco significativo de desenvolver a doença". Os outros três solventes analisados, tolueno, xilol e n-hexano, não apresentaram relação estatística com a presença de mal de Parkinson.

Tratamento

      "Nosso estudo confirma que agentes contaminantes comuns podem aumentar o risco de desenvolvimento de mal de Parkinson, o que tem implicações consideráveis em termos de saúde pública", disse Samuel Goldman, do Instituto de Parkinson em Sunnyvale, Califórnia, que co-liderou a pesquisa publicada pelo Annals of Neurology.

      "Nossas descobertas, assim como relatos de casos anteriores, sugerem que pode haver uma diferença de até 40 anos entre a exposição ao TRI e o aparecimento do mal de Parkinson, o que cria uma janela de oportunidade fundamental para que se controle o desenvolvimento da doença antes de os sintomas clínicos surgirem."

     Michelle Gardner, gerente de desenvolvimento de pesquisa da instituição Parkinson's UK disse esse é o primeiro estudo que relaciona o TRI à doença, mas frisou que "muitos dos usos anteriores do solvente foram descontinuados por razões de segurança mais de 30 anos atrás e que os sistemas de proteção em locais de trabalho em que substâncias químicas fortes como este solvente são usadas melhoraram muito nos últimos anos".

Acesso: http://www.bbc.co.uk/portuguese/noticias/2011/11/111114_parkinson_solvente_is.shtml

Congresso Brasileiro de Toxicologia Clínica

Oportunidade:

O evento proporcionará a apresentação de trabalhos e de temas relevantes relacionados às atividades dos Centros de Informação e Assistência Toxicológica, sendo um importante espaço na divulgação da produção científica nas áreas de Toxicologia Clínica e Analítica no Brasil.

O programa será abrangente, com convidados nacionais e internacionais, apresentado sob a forma de 4 cursos pré-congresso; 5 conferências; 15 mesas redondas; um painel; uma sessão de discussão de casos práticos em toxicologia clínica; uma sessão de apresentação de temas selecionados para apresentação oral, concorrendo ao prêmio de melhor trabalho do Congresso; e apresentação dos pôsteres aprovados pela Comissão Científica, que ficarão expostos durante todo o evento.

Datas importantes:

 Para mais informações acesse o site: http://www.toxicologiaclinica2012.fcm.unicamp.br/

Análise Toxicologica Sistemática: Monitoramento terapêutico de antidepressivos tricíclicos.

Análise Toxicologica Sistemática é definida pela busca químico-analítica lógica por uma substância de interesse toxicológico cuja presença não é suspeitada e cuja identidade é desconhecida.É fundamental associar achados analíticos de metodologias com baixa correlação pois é possível identificar um grande número de compostos com a mesmas metodologias. Idealmente todas as substâncias toxicologicamente relevantes devem ser isoladas, detectadas e identificadas, a despeito de sua estrutura e/ou polaridade. Seguindo três etapas:

Etapa 1: isolamento e concentração

– Hidrólise e remoção de interferentes

– Extração líquido-líquido

– Extração em fase sólida

Etapa 2: diferenciação-detecção

– Imunoensaios

– Cromatografia (CCD, CG, HPLC) com detecção

por FID, NPD, UV, MS, etc…

 Etapa 3: identificação

– Comparação com bases de dados

Amostras clínicas

·        Sangue (mais comum)

·        Cabelo (Avaliação de exposição prévia, Casos de “DFSA”)

·        Fluido oral (Saliva) (Casos de condução sob efeito de drogas

·        Urina (Análises qualitativas)

De ante desse contexto o artigo de LINDEN 2006, que descreve a Análise toxicológica sistemática e fenotipagem de CYP2C19: contribuição ao monitoramento terapêutico da amitriptilina é um bom exemplo da aplicação da análise toxicológica sistemática.

Segundo LINDEN 2006, o monitoramento terapêutico, compreendido como a determinação de concentrações plasmáticas de fármacos e a aplicação destas determinações à individualização da farmacoterapia, é uma abordagem útil quando da utilização de amitriptilina, considerando que faixas de concentração terapêutica e tóxicas estão propostas.

Entretanto, a obtenção de níveis plasmáticos terapêuticos é fortemente impactada pela variabilidade fenotípica do metabolismo. Considerando que uma parcela significativa dos pacientes não relatam o uso corrente de medicamentos e fitoterápicos aos médicos assistentes, procedimentos de análise toxicológica sistemática podem ser úteis para avaliar a co-administração de fármacos. O pesquisador desenvolveu um sistema informatizado para cálculo de parâmetros cromatográficos e busca em bases de dados previamente publicadas, disponível na rede mundial de computadores.

Este sistema permite a identificação de substâncias de interesse toxicológico com elevada probabilidade, mesmo com a utilização de métodos analíticos simples e de baixo custo. Também foi desenvolvida e validada uma metodologia para determinação simultânea de omeprazol, 5-hidróxi-omeprazol e omeprazol sulfona em plasma por HPLC-DAD, permitindo a avaliação do fenótipo metabolizador para CYP2C19 e CYP3A4 em um grupo de 38 voluntários saudáveis.

Foram identificados 5 voluntários com diferentes fenótipos metabolizadores para CYP2C19 (1 ultra-rápido, 3 extensivos e 1 pobre) receberam uma dose oral de 1mg.kg-1 de amitriptilina e forneceram amostras de sangue nos tempos 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, 24 e 48 horas pós-dose. Foram observadas diferenças nos parâmetros farmacocinéticos e nas razões metabólicas de hidroxilação entre os diferentes fenótipos para CYP2C19.

Desta forma, o cálculo do índice metabólico de desmetilação a partir das concentrações de amitriptilina e nortriptilina, determinadas em uma amostra coletada 3 horas após uma dose única ou após a primeira dose oral de amitriptilina, pôde ser utilizado para determinar o fenótipo metabolizador para CYP2C19, permitindo um ajuste precoce da posologia.

Leia mais:

LINDEN, R. Análise toxicológica sistemática e fenotipagem de CYP2C19: contribuição ao monitoramento terapêutico da amitriptilina. 2006.141 f. Tese (Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Faculdade de Biociências, Rio Grande do Sul. 2006.

Referências:

LINDEN, R. Análise toxicológica sistemática e fenotipagem de CYP2C19: contribuição ao monitoramento terapêutico da amitriptilina. 2006.141 f. Tese (Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Faculdade de Biociências, Rio Grande do Sul. 2006.

ANÁLISE DE FÁRMACOS EM MATERIAL BIOLÓGICO POR ACOPLAMENTO MICROEXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA E HPLC "NO TUBO"

            A determinação de fármacos em amostras biológicas coletadas principalmente no plasma de pacientes, tem por base o contexto clínico e o farmacocinético. Cada vez mais esse procedimento tem sido realizado na área clínica, a fim de assegurar a eficácia terapêutica e minimizar os efeitos adversos, os quais são prejudiciais à qualidade de vida do paciente e refletem na sua adesão à farmacoterapia prescrita. 

           No que se refere aos métodos de análises mais utilizados na rotina do tratamento (extração, pré-concentração e purificação) de amostras biológicas, a extração líquido-líquido (LPE) e a extração em fase sólida (SPE) são bastante empregadas, com o objetivo de eliminar interferente e aumentar a sensibilidade e seletividade analítica. No entanto, tais métodos possuem muitas desvantagens no que se refere, por exemplo, o grande gasto de solventes, tempo para execução, perda de analito, dentre outras limitações. 

           A microextração em fase sólida (SPME), desenvolvida por Pawliszyn et al. (1990), apresenta uma série de vantagens em relação ao métodos convencionais de extração por não requerer uma instrumentação analitica sofisticada e longos tempo de execução, além de permitir automação das análises, concentração dos analitos e reutilização das fibras extratoras.  A técnica de SPME tem sido realizada por cromatografia gasosa (SPME-GC) e empregada com êxito na extração de fármacos voláteis e semivoláteis em análises de amostras biológicas (Tabela 1), principalmente quando extraídas da fase gasosa, no modo "headspace", onde não ocorre interação das proteínas da amostra biológica com a fibra. Já os fármacos menos voláteis ou termicamente instáveis têm sido analisados após processos de derivatização/SPME-GC ou empregando a técnica SPME acoplada à cromatografia líquida de alta eficiência (SPME-HPLC). 

LQ: Limite de quantificação, TCA: ácido tricloroacético; PICI-MS: espectrometria de massas dom ionização química; SIM: seleção do íon monitorado; PDMS: polidimetilsiloxano; PA: poliacrilato; PDMS-DVB: polidimetilsiloxano divinilbenzeno; CW-DVB: carbowax divinilbenzendo; NPD: detector de nitrogênio e fósforo; TSD: detector termiônico específico e FID: detector de ionização de chama (Adaptação: Queiroz, M. E & Lanças, F. M, 2005). 

     













     Figura 1. Interface do SPME-HPLC


         

           O acoplamento com SPME-HPLC requer uma interface apropriada (Figura 1), em forma de um T, onde a fibra é inserida na extremidade superior e as demais extremidades, lateral e inferior, são conectadas à válvula de seis pórticos do HPLC. A dessorção dos analitos poderá ser realizada de modo dinâmico, com a fase móvel, ou, no modo estático, quando os analitos forem fortemente sorvidos na fibra.  

      Um novo sitema SPME-HPLC, denomiando SPME "no tubo" foi recentemente desenvolvido para microextração e pré-concentração de fármacos menos voláteis e/ou termicamente instáveis. Utiliza um tubo capilar aberto de sílica fundida (dispositivo SPME), com a superfície interna revestida com a fase estacionária (quimicamente ligada), o qual tem sido acoplado em linha com o sistema HPLC. O sistema SPME-HPLC "no tubo" pode ser montado fixando-se uma coluna capilar entre a alça de amostragem e a agulha do injetor automático do HPLC (Figura 2). 

Figura 2. Técnica SPME-HPLC "no tubo". 

A vantagem da técnica SPME-HPLC "no tubo" é que ela não requer uma interface específica para dessorção dos analitos, como a utilizada em SPME-HPLC convencional, permitindo, assim, a automação dos métodos cromatográfico, resultando em maior precisão e menor tempo de análise, quando comparado às técnicas manuais utilizadas em análises de rotina de fármacos em material biológico. Como as amostras biológicas são injetadas no sistema praticamente em seu estado fisiológico, diminui a exposição dos analistas a estas amostras, além de minimizar perdas do analito durante o processo de extração. 

     As principais vantagens da técnica SPME-HPLC "no tubo" quando comparadas à SPE acoplada em linha com HPLC, têm sido simplicidade, rapidez, extração em micro escala, alta sensibilidade analítica, pequeno volume de amostra, baixo custo, reutilização do capilar extrator, fácil automação e reduzido volume de solvente orgânico. Tem sido aplicada com êxito na análise de compostos hidrofóbicos e hidrofílicos presentes em amostras biológicas, podendo ser facilmente acoplada a vários métodos analíticos, principalmente os em micro escala.  

Leia mais sobre: QUEIROZ, S. C. N; COLLINS, C. H; JARDIM, I. C. S. F. Métodos de extração e/ou concentração de compostos encontrados em fluidos biológicos para posterior determinação cromatográfica. Quím. Nova, v. 24, n. 1, 2001. p. 68-76. Disponível em: http://www.scielo.br/pdf/%0D/qn/v24n1/4452.pdf

REFERÊNCIAS: 

QUEIROZ, M.E; LANÇAS, F. M. Análise de fármacos em material biológico: acoplamento microextração em fase sólida "no tubo" e cromatografia líquida de alta eficiência. Quím. Nova, v. 28, n. 5, 2005. p. 880-886. 

         

 

         

Pesquisa de fármacos em material biológico

          As intoxicações por medicamentos são causas freqüentes de procura de atendimento médico em serviços de urgência e emergência no Brasil, sendo muitos dos casos relacionados às tentativas de suicídio ou envolvendo crianças e idosos que se expuseram a doses acima da terapêutica, resultando em concentrações tóxicas na corrente sangüínea.

         No Brasil, os acidentes envolvendo medicamentos alcançam o primeiro lugar como agente causal de intoxicações. Este fato, aumenta o desafio dos laboratórios de análises toxicológicas a desenvolverem metodologias analíticas para pesquisa e identificação de fármacos envolvidos nos casos de intoxicação aguda.
         As dosagens de substâncias podem ser feitas no sangue, urina ou lavado gástrico. A investigação de fármacos é provavelmente a mais freqüente dos

testes toxicológicos e, dependendo do fármaco e das suas características fármaco-toxicológicas e do tempo decorrido da exposição, pode ser detectado na forma inalterada ou biotransformada em sangue ou na urina.

         A sistemática da análise toxicológica de urgência geralmente envolve um agente desconhecido, tornando-se um grande desafio identificar essa substância química, devido ao grande número de substâncias potenciais e a disponibilidade de quantidades limitadas na amostra. Os laboratórios mais sofisticados empregam metodologias como cromatografia gasosa (CG), cromatografia de massa (MS) e cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC). Já os laboratórios de médio e pequeno porte, geralmente dispõem de um espectrofotômetro, cuja utilização é relativamente simples, podendo determinar pequenas quantidades de toxicante através de comparação dos espectros de ultravioleta de substâncias de referência.

    A pesquisa toxicológica de fármacos em material biológico, através da espectrofotometria, proporciona um teste simples e rápido para a identificação do agente causal em eventos de intoxicação aguda, podendo excluir ou sugerir a presença de determinada substância.

     Os métodos espectrofotométricos, na região do ultravioleta, no intervalo de 220 a 320nm, são indicados tanto para o reconhecimento quanto para a confirmação de compostos orgânicos extraídos de material biológico. Entretanto, sua utilização exige, antes de sua aplicação, uma padronização prévia do comportamento das substâncias de interesse.

      Uma das maiores vantagens da baixa seletividade da espectroscopia UV é que compostos da mesma classe frequentemente apresentam o mesmo padrão de absorção; assim, substâncias não identificadas podem ser relacionadas a uma determinada classe com base em suas características espectrais.

     Um estudo realizado por Américo et al., (2008) desenvolveu um procedimento simples para análise de rotina na triagem de fármacos, usando a espectrofotometria UV nos casos de suspeita de intoxicações. Forneceram-se o perfil de 40 fármacos, classificados de acordo com o seu caráter (ácido, básico e neutro). Com essas análises foi possível identificar os picos de absorbância máxima nos respectivos comprimentos de onda na faixa de ultravioleta, bem como o limite de detecção de cada fármaco.

Referência: Américo, M. A.; Mossin, S. A. G.; Nishiyama, P. Perfil de fármacos por espectrofotometria no ultravioleta. Revista Brasileira de Análises Clínicas, vol. 40(4): 257-259, 2008.

Leia mais: Validação de metodologia analítica e estudo de estabilidade para quantifcação sérica de paracetamol. Disponível em: http://www.scielo.br/pdf/jbpml/v46n2/a12v46n2.pdf

Pesquisa de metais em material biológico

     Segundo o dicionário de Ecologia e Ciências Ambientais (1998), metais pesados são aqueles metais com número atômicos de médio e altos, como o cobre, o cádmio, a prata, o arsênio, o cromo e o mercúrio, é que são tóxicos em concentrações relativamente baixas. Persistem no ambiente e podem se acumular em níveis que interrompem o crescimento das plantas e interferem na vida animal.

     Eles constituem a maior fonte poluidora inorgânica de solos e águas, sendo introduzidos no ambiente, principalmente através de fertilizantes, pesticidas, combustão de carvão e óleo, emissões veiculares, mineração, fundição, refinamento e incineração de resíduos urbanos e industriais (Tavares & Carvalho, 1992).

     Os metais formam um importante grupo de substâncias tóxicas que apresentam muitas dificuldades quanto à sua análise química sistemática. Nos países desenvolvidos o maior número de casos conhecidos de intoxicação por estes agentes deve-se a intoxicação crônica, resultante da exposição ambiental ou ocupacional (Moffat et al., 2004).

   

     No campo da medicina ocupacional, a pesquisa de metais pesados destaca-se a monitorização biológica indivíduos expostos a metais, auxiliando na prevenção e no acompanhamento de doenças. Além disso, no diagnóstico de intoxicações agudas ou crônicas, no controle de amostras ambientais como (água, solo, ar) e no controle da qualidade de alimentos a pesquisa de metais também é extremamente importante.

     A análise de metais pesados nos diversos materiais deve obedecer a um critério de planejamento em relação à coleta. A quantidade de material a ser amostrada e quantificada deve ser definida de forma a evitar perdas ou contaminações. Isto é feito em relação aos elementos que se quer determinar, a faixa de concentração esperada, o tipo de matriz e o método a ser utilizado na quantificação.

     O método clássico para a destruição da matéria orgânica dissolvida é a mineralização por via úmida, que emprega o aquecimento da amostra e adição de reagentes como ácidos oxidantes ou misturas destes ou, ainda, peróxido de hidrogênio (H₂O₂). Porém, estes métodos apresentam a desvantagem de oferecer um alto risco de contaminação da amostra, principalmente no caso de amostras que contêm metais no nível de traço,4 além de requererem um grande consumo de reagente e um longo tempo de mineralização. Sendo assim, uma alternativa à mineralização ácida é a mineralização empregando irradiação ultravioleta (UV) que, além de ser eficiente, minimiza a possibilidade de contaminação da amostra devido ao uso de pequenas quantidades de ácidos e peróxido de hidrogênio (Carvalho et al., 2008).

     A espectrofotometria de absorção atômica  (EAA ou AAS -  Atomic absorption spectrometry) é uma técnica bem estabelecida na análise elementar ao nível vestigial de diferentes tipos de matrizes. Trata-se da técnica mais vulgarmente usada na determinação de metais e metalóides (Moffat et al, 2004). O princípio básico dessa técnica é a geração de átomos livres a partir de energia térmica, os átomos gerados recebem luz de um comprimento de onda específico para sua absorção. A extensão da absorção de radiação é diretamente proporcional ao número de átomos, ou concentração, do elemento presente na amostra.

Leia mais sobre...

- Detecção da presença de metais pesados em estruturas biológicas como solo, plantas e cabelos humanos: Duarte, R. G. S.; Pasqual, A. Avaliação do cádmio (Cd), chumbo (Pb), níquel (Ni) e zinco (Zn) em solos, plantas e cabelos humanos. Energia na Agricultura, Botucatu, v.15, n.1, p.46-58, 2000.  

- Poluição ambiental por metais pesados: http://www.vivaterra.org.br/vivaterra_metais_pesados.htm 

Referências:

Carvalho, L. M. [et al] Determinação voltamétrica de metais em águas e fluidos biológicos empregando mineralização de amostras com radiação ultravioleta. Quím. Nova vol.31 no.6 São Paulo, 2008.

Tavares, T. M.; Carvalho, F. M. Avaliação da exposição de populações humanas a metais pesados no ambiente: exemplos do Recôncavo Bahiano. Quim Nova 15: 147-153., 1992.

Moffat AC, Osselton MD, Widdop B, Galichet LY (eds.). Clarke’s analysis of drug and

poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmorten material. 3rd edition. London – Chicago: Pharmaceutical Press (PhP), 2004.